人源性DNA聚合酶β原核蛋白的表达、蛋白纯化及其功能初探

仲召阳; 张志敏; 李梦侠; 戴楠; 曾林立; 王东

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人源性DNA聚合酶β原核蛋白的表达、蛋白纯化及其功能初探

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[目的]利用人源性DNA聚合酶β原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化DNA聚合酶β蛋白,并检测蛋白活性。[方法]将重组质粒pCR-BluntII-TOPO-DNApolβ转化入大肠杆菌E.coli中,IPTG诱导其表达并鉴定。利用金属螯合层析技术进行蛋白纯化,得到人源性DNApolβ融合蛋白,纯化的融合蛋白用EK酶酶切后,通过Ni2+柱纯化获得高纯度的人源性DNApolβ蛋白,电泳迁移率变动分析实验检测DNApolβ融合蛋白的AP修复活性。[结果]转化入大肠杆菌E.coliRosetta2的DNApolβ诱导表达最好,蛋白表达量高。金属螯合层析纯化后得到融合蛋白经EK酶切后得到高纯度的人源性DNApolβ蛋白,EMSA实验证明所纯化的DNApolβ融合蛋白不具有AP修复活性。[结论]利用原核表达载体pCR-BluntII-TOPO-DNApolβ在E.coliRosetta2中表达和纯化获得高纯度的DNApolβ融合蛋白,为下一步开展DNApolβ蛋白的生物学功能研究打下基础。

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来源
《现代预防医学》 |2012年第4期|930-932935|共3页
作者
仲召阳; 张志敏; 李梦侠; 戴楠; 曾林立; 王东;
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作者单位

第三军医大学大坪医院野战外科研究所肿瘤中心;

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正文语种 chi
中图分类 R346;
关键词
DNA聚合酶β; 原核表达; 蛋白纯化;

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