非洲猪瘟病毒p54蛋白的截短表达及其单克隆抗体的制备

郑南南; 东梦珂; 吴宏举; 侯浩宇; 陈寅龙; 李潮; 赵慧君; 张改平; 杜永坤

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非洲猪瘟在我国首次暴发至今已经3年多,给我国养猪业及其相关产业带来了严重的损失。本试验主要以非洲猪瘟病毒E183L基因编码的p54蛋白为研究对象,设计扩增截短E183L基因的引物,构建p54蛋白重组表达载体pET-28a(+)-p54,转化至感受态细胞BL21(DE3)中进行诱导表达,获得可溶性表达的重组p54蛋白,通过Ni柱得到良好纯化。之后免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾脏与骨髓瘤细胞融合制备单克隆抗体,通过ELISA方法筛选和3次亚克隆共制备出2株能稳定分泌针对ASFV p54蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株。经ELISA测定抗体腹水效价在1∶100000~1∶1000000之间。Western blot检测表明单克隆抗体与p54蛋白能够特异性反应。经鉴定2株单克隆抗体亚型均为IgG2b,κ。该研究获得的单克隆抗体将为p54蛋白的生物学功能的研究和ASFV血清学检测奠定基础。

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来源
《中国兽医学报》 |2022年第11期|2139-2144|共6页
作者
郑南南; 东梦珂; 吴宏举; 侯浩宇; 陈寅龙; 李潮; 赵慧君; 张改平; 杜永坤;
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作者单位

河南农业大学动物医学院国家动物免疫学国际联合研究中心;

河南郑州450046;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
非洲猪瘟病毒; p54蛋白; 原核表达; 单克隆抗体;

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