生物素标记UTP及温度值对HCV细胞外聚合酶分子复制模型的影响

杨振; 蒋建东; 祁自柏; 陈鸿珊; 张华远; 李河民

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生物素标记UTP及温度值对HCV细胞外聚合酶分子复制模型的影响

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目的　研究建立细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的生物素标记UTP浓度及温度值 ,为筛选药物创造条件。方法　使用高保真PfuDNA聚合酶进行反转录及套式PCR ,从我国HCVRNA阳性病人血清中扩增出HCVNS5bRNA聚合酶全长基因序列 ,构建原核表达载体pET 30a NS5b。在多个载体中选取pET 30a作为表达载体 ,选择诱导表达条件。利用Ni2十金属离子螯和亲和层析将其纯化 ,对该酶蛋白的变性和复性条件进行研究。利用 96孔DNA BAND培养板 ,建立生物素标记检测HCVNS5b聚合酶活性的模型。结果　测序及读码框架分析结果表明 ,已得到相关HCVNS5bRNA聚合酶全基因序列。在最佳表达条件下 ,诱导表达的融合蛋白 (相对分子质量6 5 0 0 0 ) ,纯度大于 92 .83%HCV聚合酶活性集团完整。建立了细胞外丙型肝炎病毒聚合酶复制模型使用的最佳生物素标记UTP浓度及温度值。结论　HCV聚合酶得到高效表达和有效纯化 ,以及HCV聚合酶作用模板及温度的最佳条件分别为 0 .5mmol/L及 37℃。

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来源
《中国生物制品学杂志》 |2004年第2期|87-89|共4页
作者
杨振; 蒋建东; 祁自柏; 陈鸿珊; 张华远; 李河民;
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作者单位

中国药品生物制品检定所;

中国医学科学院医药生物技术研究所;

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正文语种 chi
中图分类 R373.21;
关键词
丙型肝炎病毒; 聚合酶; 融合蛋白; 原核表达; 复制; HCV; 生物素标记;

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