抗人Lipocalin型前列腺素D合酶单链抗体基因的构建与表达

朱国华; 陈德宇; 黄宇烽; 宛传丹; 许晓风

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抗人Lipocalin型前列腺素D合酶单链抗体基因的构建与表达

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利用RT-PCR技术,从稳定分泌抗人Lipocalin型前列腺素D合酶(Lipocalin-typeprostaglandinDsynthase,L-PGDS)单克隆抗体的鼠杂交瘤细胞中获得抗体可变区基因;通过一柔性连接短肽[(Gly)4Ser]3,SOEPCR法将此重、轻链可变区拼接成完整的抗人L-PGDS单链抗体基因,并装入表达载体pET-28a(+),在BL21宿主菌中进行表达。经SDS-PAGE检测显示,在低剂量0.02mmol/LIPTG诱导和较低温度25℃或28℃条件下培养,重组菌表达了一定量的可溶性单链抗体。后经Ni-NTA亲和层析柱纯化,得率为2mg/100ml,纯度达92%;双夹心ELISA和免疫荧光竞争抑制实验证实,纯化后的单链抗体具有较好的亲和力和特异性。

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来源
《现代免疫学》 |2005年第3期|182-186|共5页
作者
朱国华; 陈德宇; 黄宇烽; 宛传丹; 许晓风;
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作者单位

南京军区南京总医院生殖遗传室;

南京师范大学生命科学学院;

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正文语种 chi
中图分类免疫分子生物学（免疫化学）;
关键词
Lipocalin型前列腺素D合酶; 单链抗体; 构建; 表达;

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