人肥胖基因大肠杆菌表达载体的构建及其诱导表达

刘建忠; 敖敬; 田为宇; 周卫; 鲁礼林; 张晓龙

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人肥胖基因大肠杆菌表达载体的构建及其诱导表达

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通过设计1对PCR引物(上游引物,5-′GCCATATGGTGCCGATCCAAAAAG-3′,下游引物,5-′GAGAATTCCCTTCAAGGCCTCAG-3′),采用PCR方法扩增出人肥胖基因编码成熟肽的核苷酸序列,将扩增产物从琼脂糖凝胶上回收后插入测序载体pMD-18-T后进行了核苷酸序列测定。将经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的扩增产物插入经EcoRⅠ和NdeⅠ双酶切后的大肠杆菌表达载体pET-28a(+),构建了可在大肠杆菌中高效表达人瘦蛋白的表达载体。将表达载体转化入大肠杆菌菌株BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE检测,结果表明构建的人肥胖基因表达载体得到高效表达,重组蛋白占到菌体总蛋白的31.2%。

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来源
《华中农业大学学报》 |2008年第6期|705-708|共4页
作者
刘建忠; 敖敬; 田为宇; 周卫; 鲁礼林; 张晓龙;
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作者单位

武汉科技大学化学工程与技术学院;

武汉科技大学计算机学院;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类转化及克隆;基因的表达;
关键词
人肥胖基因; 原核表达载体; 诱导表达;

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