人端粒酶逆转录酶真核表达质粒转染人成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究

解慧琪; 杨志明; 屈艺; 李秀群; 秦廷武; 赵金梅; 刘军

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目的　　分析人端粒酶逆转录酶 (h TERT)真核表达质粒 p GRN14 5转染人成纤维细胞的生物学特性。方法　体外分离培养小儿包皮成纤维细胞 ,脂质体法将构建的 p GRN14 5转染人成纤维细胞 ,经潮霉素 B筛选 ,扩增培养阳性克隆。 RT- PCR法、TRAP- PCR法分析细胞端粒酶活性。流式细胞术检测细胞增殖周期及细胞凋亡率 ,对转染后细胞行染色体核型分析及免疫组织化学法检测胶原分泌能力。结果　转染后培养的人成纤维细胞形态与转染前相比无明显改变 ,转染细胞稳定地表达端粒酶活性 ,流式细胞术分析转染前后成纤维细胞的增殖周期无明显改变 ,细胞凋亡率较转染前降低。经 p GRN14 5转染的人成纤维细胞保持正常的二倍体核型 ,具有正常分泌、型胶原的能力。结论　 p GRN14 5转染的人成纤维细胞稳定地表达端粒酶活性 ,细胞寿命明显延长。

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来源
《中国修复重建外科杂志》 |2002年第3期|195-199|共5页
作者
解慧琪; 杨志明; 屈艺; 李秀群; 秦廷武; 赵金梅; 刘军;
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作者单位

四川大学华西医院修复重建外科研究室;

四川大学基础与法医学院分子生物学开放实验室;

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正文语种 chi
中图分类生物材料学;
关键词
人端粒酶逆转录酶; 真核表达质粒; 体外培养; 生物学特性; 研究; 组织工程; 端粒酶; 成纤维细胞; 基因转染;

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