日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝星状细胞差异表达cDNA文库的构建和筛选

郑敏; 陈峰; 蔡卫民; 刘荣华

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日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝星状细胞差异表达cDNA文库的构建和筛选

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目的构建日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝星状细胞差异表达基因的消减cDNA文库,并筛选差异表达基因.方法取日本血吸虫尾蚴经腹部感染小鼠致肝纤维化.采用抑制性消减杂交技术(SSH),分离小鼠肝星状细胞(HSC)及正常小鼠HSC,通过对比寻找差异表达基因.将其与T载体连接(T/A克隆),其产物转化大肠埃希菌DH5α,经文库扩增后,随机挑取白色克隆进行酶切鉴定,克隆经过正、反向杂交,阳性克隆经过测序和BLAST(局部相似性基本查询工具)进行表达序列标签(ESTs)差异基因分析.最后经模拟Northern印迹确认基因表达差异.结果扩增消减cDNA文库获得400余个白色阳性克隆,随机挑取的克隆经酶切鉴定后均有200～600 bp插入片段.ESTs分析获得76个序列,其中70个序列提示与血吸虫病肝纤维化或与其相关的基因,6个在公共数据库中未找到同源序列片段.结论用SSH法及T/A克隆技术成功构建了肝纤维化小鼠HSC与正常小鼠HSC差异表达基因的消减cDNA文库.

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来源
《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 |2005年第4期|193-197|共5页
作者
郑敏; 陈峰; 蔡卫民; 刘荣华;
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作者单位

浙江大学医学院附属一院传染病研究所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类血吸虫病;
关键词
日本血吸虫病; 寄生虫性肝疾病; 抑制性消减杂交; 基因表达;

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