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探究慢病毒介导BMP-2及VEGF-165转染山羊骨髓间充质干细胞向软骨方向分化的影响

         
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目的:探究慢病毒介导骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)及血管内皮生长因子-165(vascular endothelial growth factor-165)转染山羊骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)向软骨方向分化的影响。方法:采用全骨髓贴壁法培养原代山羊的BMSCs,传代后在慢病毒的介导下导入目的基因,研究山羊BMSCs作为基因共转移靶细胞的可行性,以及细胞的体外培养条件、增殖情况,转染后向成软骨方向分化等生物学变化。结果:Lv-BMP2-VEGF165组BMP-2 mRNA的表达与BMP-2组无明显差异(P>0.05),VEGF-165 mRNA的表达与VEGF-165组无明显差异(P>0.05);Lv-BMP2-VEGF165转染组OCN mRNA的表达高于单基因转染组(P<0.05);BMP-2和VEGF-165蛋白只有在Lv-BMP2-VEGF165组中高效率表达;Lv-BMP2-VEGF165组OCN蛋白的表达显著高于其他各组(P<0.01),Lv-BMP2-VEGF165转染组碱性磷酸酶活性明显高于其他组。结论:BMP-2、VEGF-165、BMP-2/VEGF-165可成功转入到山羊BMSCs内,并能长期稳定表达,在新骨形成过程中,二者的协同作用能通过促进碱性磷酸酶的生成、骨钙素的合成并使细胞向成软骨方向发展。

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