CELI粗提物用于点突变检测的技术

崔海瑞; 李春楠; 吴殿星; 舒庆尧

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本文以含有单个错配的DNA异质双链为底物鉴定芹菜CEL I粗提物的错配切割酶学活性,并对影响其切割错配的反应条件进行优化,建立以CEL I粗提物为基础的点突变酶学检测技术。结果表明:自制的CEL I粗提物能有效识别和切割DNA异质双链中碱基错配。当异质双链DNA量恒定时,在一定的范围内CEL I粗提物用量对错配切割效果的影响不明显,由PCR产物形成的12μl异质双链DNA可用蛋白质总量约900ng的CEL I粗提物进行有效切割。常规PCR缓冲液与已报道的CEL I缓冲液的效果基本相近,实际工作中可选用PCR缓冲液作CEL I酶切反应液;缓冲液pH值对错配切割效果具有明显的影响,适宜pH约近中性(6.5～7.5)。Zn2+对错配切割具有促进作用,但不是必需的,最适浓度为0.25mmol/L。CEL I粗提物切割错配的反应时间以42℃下酶切20min为宜。比较试验显示,本研究建立技术的点突变检测效果与Transgenomic公司试剂盒SurveyorTM基本相同。

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来源
《核农学报》 |2011年第1期|37-42|共6页
作者
崔海瑞; 李春楠; 吴殿星; 舒庆尧;
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作者单位

浙江大学原子核农业科学研究所/农业部核农学重点开放实验室;

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正文语种 chi
中图分类鸡;
关键词
CELI粗提物; 切割活性; 条件优化; 突变检测;

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