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慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响

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运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.

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来源
《南京大学学报：自然科学版》 |2014年第6期|883-889|共7页
作者
李燕; 陆伟; 竺丽梅; 邵燕; 陈诚; 刘巧; 韩晓冬;
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作者单位

南京大学医学院;

江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
慢病毒(Lentivirus); 绿色荧光蛋白(GFP); 小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs); 转染; 组织工程; green; fluorescent; protein; (GFP); mesenchymal; stem; cells; (MSC);

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