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首页> 中文期刊> 《福建农业学报》 >兔源强毒力金黄色葡萄球菌双重PCR检测方法的建立

兔源强毒力金黄色葡萄球菌双重PCR检测方法的建立

         
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[目的]建立检测兔源强毒力金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的双重PCR检测方法,为兔葡萄球菌病的诊断提供技术支持.[方法]根据兔源金黄色葡萄球菌的nuc和pvl两种毒力基因的保守序列分别设计了两对特异性引物进行双重PCR扩增,对双重PCR反应体系的混合引物浓度和退火温度进行优化,对双重PCR检测方法的特异性、敏感性和准确性进行验证.[结果]当双重PCR反应体系混合引物的浓度为0.6μmol·L-1、退火温度为59.6℃时,双重PCR的扩增效果最优.该双重PCR检测方法特异性好,能扩增出兔源强毒力金黄色葡萄球菌的nuc(320 bp)和pvl(585 bp)基因片段以及低毒力菌株的nuc(320 bp)基因片段,对兔源多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌等4种常见兔源细菌性病原菌以及阴性对照均无交叉反应.该方法敏感性高,能分别检出10 pg和100 fg的强毒力和低毒力兔源金黄色葡萄球菌基因组DNA.该方法重复性好,批内和批间重复性试验的变异系数均为0;该方法准确性好,对119份临床样品的检测结果与已报道的检测金黄色葡萄球菌nuc和pvl基因的单重PCR检测方法的符合率为100％.[结论]针对nuc和pvl两种毒力基因建立的双重PCR检测方法具有良好的特异性、敏感性、重复性和准确性,为兔源强毒力金黄色葡萄球菌的检测提供了有效的技术支持.

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