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天麻茎秆养生茶的研制及其抗惊厥作用研究

         
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cqvip:为合理利用长白山道地资源,以天麻茎秆为原料,与杨黄、青楷槭进行配伍,研制一款养生茶,并对其抗惊厥作用进行探究.在单因素实验基础上,采用正交实验设计、感官评分标准、高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)等方法对天麻茎秆养生茶的制备工艺进行优化;对其可溶性糖、总氨基酸和水浸出物的含量进行测定;应用气相色谱-质谱法(Gas Chromatography-mass Spectrometry,GC-MS)对其香气成分进行分析,建立指纹图谱;采用戊四氮(PTZ)和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)建立两种小鼠惊厥模型,观察天麻茎秆养生茶(3000 mg/kg)对小鼠惊厥发作的行为影响,通过ELISA和免疫蛋白印迹分析(Western Blot)法检测小鼠脑中γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)、一氧化氮(NO)、五羟色胺(5-HT)、Na+-K+-ATP酶(Na+-K+-ATP)、天冬氨酸(Asp)、总抗氧化能力(AOC)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽还原酶(GSR)、丙二醛(MDA)、白介素1β(IL-1β)、白细胞介素10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)以及凋亡蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的含量变化;观察各组小鼠脑皮层及海马的病理学变化;免疫组织化学方法测定组织中c-Fos和TLR4蛋白的表达水平;并对天麻茎秆及养生茶的急性毒性进行了评价.结果显示:天麻茎秆养生茶的最佳工艺条件为:制天麻茎秆0.6 g,制杨黄0.1 g、青楷槭1.0 g,加沸水200 mL,冲泡时间10 min,冲泡次数为3.在此工艺条件下,测得可溶性糖量为39.4 mg/kg;总氨基酸量为3.2 mg/kg;冷、热浸法测得水浸出物的含量分别为391.6 g/kg、79.1 g/kg;建立了该养生茶的指纹图谱;且该养生茶可显著延长小鼠惊厥潜伏期、缩短惊厥时间、降低惊厥小鼠癫痫等级及死亡率,改善由PTZ、NMDA所致的脑内指标变化,减少神经元受损,降低脑皮层及海马组织中的c-Fos、TLR4蛋白表达水平;急性毒性结果表明,天麻茎秆及养生茶对小鼠的毒性极小,几乎无毒.天麻茎秆养生茶具有良好的抗惊厥作用;可以为合理开发利用这三种资源提供依据.

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