一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究

党胜春; 陈荣芳; 王平江; 冯舒; 张建新

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一氧化氮合酶基因转染小鼠内皮祖细胞的实验研究

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目的探讨利用脂质体介导内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因体外转染小鼠骨髓来源的内皮祖细胞(EPC)的可行性.方法密度梯度离心法分离ICR小鼠骨髓来源单个核细胞培养制备小鼠EPC并鉴定;构建、扩增、提取并纯化pcDNA3.0/eNOS基因质粒;用EPC培养基配成2×105·mL-1细胞悬液,按0.6 mL/孔重新铺6孔板,待细胞生长至80％左右融合时,用脂质体LipofectamineTM 2000体外转染eNOS基因至EPC.转染48 h后,采用RT-PCR检测EPC中eNOS的表达,硝酸还原酶法检测EPC中一氧化氮(NO)的含量,荧光探针DCFH-DA活性氧检测氧自由基(ROS)的含量.结果成功培养EPC,成功构建pcDNA3.0/eNOS基因载体.转染48 h后,EPC中eNOS表达量明增加(P＜0.01),NO含量明显升高(P＜0.01),ROS含量明显降低.结论脂质体介导eNOS基因能够有效转染小鼠EPC,并能在EPC中有效表达.

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来源
《广东医学》|2014年第22期|3464-3467|共4页
作者
党胜春; 陈荣芳; 王平江; 冯舒; 张建新;
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作者单位

江苏大学附属医院普外科江苏镇江212001;

江苏大学附属医院普外科江苏镇江212001;

江苏大学附属医院普外科江苏镇江212001;

江苏大学附属医院普外科江苏镇江212001;

江苏大学附属医院普外科江苏镇江212001;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
内皮祖细胞; 内皮型一氧化氮合酶基因; 一氧化氮; 氧自由基;

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