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胎鼠海马神经元的无血清原代培养方法与形态学观察

摘要

目的 建立SD大鼠胎鼠海马神经元的分离、培养方法,观察体外培养过程中神经元的形态学变化,为进行海马神经元的体外研究提供技术支持.方法 分离18天胎龄的SD大鼠胎鼠的海马区,经机械吹打,台盼蓝计数后,采用无血清培养基接种于24孔板.每天在显微镜下进行神经元的形态观察;第7天用免疫组化染色法检测微管相关蛋白2 (MAP2)的表达,进行神经元鉴定及纯度计算.结果 机械分离18天胎龄的SD大鼠胎鼠海马得到细胞,经台盼蓝染色,细胞存活率在98%以上.神经元在体外生长良好,培养第7~10天时胞体最为丰满,神经元突起间互相接触形成致密的网络,28天时细胞数量明显减少,可见大量变性的神经元细胞碎片.MAP2鉴定结果显示,培养7天的海马神经元纯度为92.8%.结论 此培养方法获得的海马神经元纯度高、体外存活时间长,具有简便易行,结果稳定的优点,可作为神经元体外培养的良好模型.

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