A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

杨钰楚; 王晨曦; 周雪珂; 赵军; 徐志文; 朱玲

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A型塞内卡病毒RT-LAMP检测方法的建立及应用

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为建立一种利用逆转录环介导等温核酸扩增(RT-LAMP)快速检测A型塞内卡病毒(SVA)的方法,从SVA细胞培养液中提取总RNA,根据SVA VP1基因序列,设计一套对应目的片段6个区域的4条特异性引物进行核酸扩增,建立RT-LAMP检测方法.利用建立的RT-LAMP检测方法对口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒与塞内卡病毒进行特异性试验.将SVA VP1质粒10倍梯度稀释液作为模板(1×100～1×107拷贝)进行RT-LAMP和RT-PCR反应,测试RT-LAMP检测方法的灵敏性.采集疑似发病猪的鼻腔拭子和水疱液共126份样品,应用RT-LAMP和RT-PCR检测,加入SYBR GreenⅠ进行可视化鉴定.结果表明,与传统RT-PCR相比,RT-LAMP检测方法灵敏度高1000倍,且与其他病毒无交叉反应,具有高度敏感性和特异性.临床样品检测结果显示,鼻腔拭子样本SVA阳性率为29.6％,水疱液样本SVA阳性率为100.0％,2种方法检测结果一致,符合率为100％.综上所述,本研究建立的RT-LAMP检测方法准确、简便、经济有效,尤其适用于现场和基层实验室对SVA的快速诊断.

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来源
《江苏农业学报》 |2019年第4期|868-873|共6页
作者
杨钰楚; 王晨曦; 周雪珂; 赵军; 徐志文; 朱玲;
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作者单位

四川农业大学动物医学院;

四川成都 611130;

四川农业大学动物医学院;

四川成都 611130;

四川大学生命科学学院;

四川成都 611130;

四川农业大学动物疫病与人类健康四川省重点实验室;

四川成都 611130;

四川农业大学动物医学院;

四川成都 611130;

四川大学生命科学学院;

四川成都 611130;

四川农业大学动物医学院;

四川成都 611130;

四川大学生命科学学院;

四川成都 611130;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类病毒（滤过性病毒）;
关键词
A型塞内卡病毒; RT-LAMP; 快速检测;

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7. 塞尼卡病毒的分离鉴定、RT-LAMP检测方法的建立与单克隆抗体的制备 [A] . 曾繁文 . 2019

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