牦牛热休克蛋白70-12B基因(HSPA12B)的克隆及其在体外受精胚胎中的表达

吕鹏; 潘阳阳; 崔燕; 何翃闳; 刘鹏刚; 李秦; 郑红飞; 樊江峰; 余四九

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为研究牦牛(Bos grunniens)热休克蛋白70-12B基因(heat shock 70 kD protein-12B,HSPA12B)的序列特性及其在体外受精胚胎中的表达情况,本研究根据黄牛(Bos taurus)HSPA12B基因序列5'端和3'端的保守序列设计特异性引物,RT-PCR扩增之后通过基因克隆得到HSPA12B基因(GeneBank登录号:KR258751),利用生物学信息软件对其进行生物学信息分析,并采用实时定量PCR(quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)检测其在牦牛体外受精胚胎2-4细胞期、5-8细胞期、桑葚期、囊胚期4个不同时期胚胎中的表达水平.生物学信息分析结果显示,牦牛HSPA12B基因序列具有一个长705 bp的编码区,可编码234个氨基酸,其中丙氨酸(Ala)含量最高(10.3％),天冬酰胺(Asn)含量最少(0.9％);同源性和系统进化树分析显示,牦牛HSPA12B基因与黄牛HSPA12B的同源性最高,为99.5％,表明HSPA12B在进化中具有高度保守性;编码产物无信号肽,为非跨膜蛋白,不属于分泌蛋白,整体表现为亲水性.qRT-PCR检测结果显示,HSPA12B在牦牛体外受精2-4细胞期胚胎、5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中均有表达;HSPA12B在2-4细胞期胚胎中的相对表达量分别是在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中相对表达量的14.814 8、4.269 9和40.485 8倍;HSPA12B在2-4细胞期胚胎中的相对表达量,均与在5-8细胞期胚胎、桑椹胚和囊胚中的相对表达量差异性极显著(P＜0.01).本研究提示,HSPA12B在牦牛体外受精胚胎的发育过程中非常重要,可能起着抑制细胞凋亡,延缓细胞衰老,调控胚胎早期发育的作用.

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来源
《农业生物技术学报》|2015年第9期|1226-1233|共8页
作者
吕鹏; 潘阳阳; 崔燕; 何翃闳; 刘鹏刚; 李秦; 郑红飞; 樊江峰; 余四九;
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作者单位

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

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甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

甘肃农业大学动物医学院,兰州730070;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
牦牛; 热休克蛋白70-12B基因(HSPA12B); 基因克隆; 生物信息学分析; 体外培养(IVF); 实时荧光定量PCR(qRT-PCR);
入库时间 2024-01-26 21:15:38

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