银杏果仁抗菌蛋白的分离纯化及其基因克隆和原核表达初步研究

刘缙; 王亚红; 王强; 刘曾甄; 郭蔼光

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通过40%及80%(NH4)2>SO4>分级盐析,CM Sephorose F.F.离子交换层析和Superdex 75凝胶过滤层析;从银杏(Ginkgo biloba)种仁中分离纯化到一种表观分子量约为12 KD的抗菌蛋白.经过MALDI-TOF-MSPMF鉴定表明,该蛋白与一种新型抗菌蛋白Gnk2(ginkbilobin-2)具较高匹配率(P<0.05);根据ESI-MS/MS内肽氨基酸测序结果设计简并引物,扩增该蛋白基因一段,经比对发现与Gnk2基因序列相似性也达99%.按照Gnk2基因序列设计同源引物,利用RT-PCR克隆该抗菌蛋白全长基因,提交GeneBank(Accession No.FJ865399),并以此构建原核表达载体pGEX-GK2-1转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),SDS-PAGE和Western blot分析表明,融合蛋白在大肠杆菌中能够高效表达.

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来源
《农业生物技术学报》 |2010年第2期|246-253|共8页
作者
刘缙; 王亚红; 王强; 刘曾甄; 郭蔼光;
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作者单位

西北农林科技大学生命学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;

西北农林科技大学生命学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;

西北农林科技大学生命学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;

西北农林科技大学生命学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;

西北农林科技大学生命学院,陕西省农业分子生物学重点实验室,杨凌,712100;

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正文语种 chi
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关键词
银杏; 抗菌蛋白; 克隆; 原核表达;

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