五节芒ISSR-PCR反应体系的优化

金琳; 葛刚; 陈少风; 杨赛钢; 章泉

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五节芒ISSR-PCR反应体系的优化

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摘要

[目的]保护五节芒的种质资源并为其开发利用奠定基础.[方法]以五节芒DNA为材料,分析DNA浓度、Mg2+浓度、dNTP浓度、Taq DNA聚合酶的含量以及退火温度对ISSR-PCR扩增结果的影响.并通过单因子试验对ISSR-PCR反应体系进行优化.[结果]建立了五节芒ISSR-PCR的最佳体系:25 μl反应体系中10×PCR Buffer 2.5 μl、0.2 mmol/L 4×dNTP、1.5 mmol/L Mg2+、0.75 U Taq DNA聚合酶.PCR反应程序为94 ℃预变性5 min;94 ℃变性30 s;51～53 ℃退火30 s,72 ℃延伸50 s,40个循环;72 ℃再延伸7 min.利用优化反应体系从100个ISSR通用引物中筛选出了11个稳定性高、重复性好的引物.[结论]这一优化体系的建立为今后利用ISSR标记技术研究五节芒遗传多样性奠定了基础.

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来源
《安徽农业科学》 |2009年第29期|14041-1404314077|共4页
作者
金琳; 葛刚; 陈少风; 杨赛钢; 章泉;
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作者单位

南昌大学生命科学与食品工程学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学与食品工程学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学与食品工程学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学与食品工程学院;

江西南昌;

330031;

南昌大学生命科学与食品工程学院;

江西南昌;

330031;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类农业生物工程;
关键词
五节芒; 基因组DNA; ISSR-PCR; 优化;

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