采用串联亲和纯化质谱分析DJ-1的相互作用蛋白

魏旺丽; 谭潭; 崔亚娟; 汤参娥

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采用串联亲和纯化质谱分析DJ-1的相互作用蛋白

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目的采用RNA干扰技术下调DJ-1基因在肺鳞癌细胞HTB-182中的表达, 采用串联亲和纯化质谱（TAP-MS）技术寻找DJ-1在HTB-182细胞系中的相互作用蛋白。方法构建靶向DJ-1基因siRNA慢病毒载体, 感染HTB-182细胞（DJ-1 siRNA组）, 并设立慢病毒载体对照组（Control siRNA组）及空白对照组, 采用Western blot法检测DJ-1蛋白表达水平, 建立内源性的DJ-1蛋白表达沉默的si-DJ-1-HTB-182细胞。设计DJ-1的特异性引物, 构建带有链霉素结合肽标签（SBP）、钙调蛋白结合肽标签（CBP）的DJ-1表达质粒pNTAP-DJ-1, 用脂质体稳定转染细胞系DJ-1 siRNA HTB-182, G418筛选阳性克隆, Western blot进行验证, TAP-MS技术寻找DJ-1的相互作用蛋白。结果 DJ-1 siRNA干扰组中DJ-1的蛋白质表达明显低于空质粒（NC）组和空白对照（BC）组（P＆0.05）;成功构建了稳定表达pNTAP-DJ-1质粒的HTB-182细胞系;TAP-MS筛选到DJ-1相互作用的三个蛋白质:细胞角蛋白1（Keratin 1）、细胞角蛋白10（Keratin 10）和NADPH氧化酶活化蛋白P47（P47 Px）。结论 Keratin 1、Keratin 10和P47 Px可能是DJ-1蛋白的相互作用蛋白。

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来源
《中国医师杂志》 |2021年第10期||共页
作者
魏旺丽; 谭潭; 崔亚娟; 汤参娥;
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作者单位

湖南省郴州市第一人民医院检验医学中心;

中南大学湘雅二医院血液内科;

中南大学湘雅医院医学科学研究中心;

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正文语种 chi
中图分类肺肿瘤;
关键词
HTB-182细胞; 基因; DJ-1; 相互作用蛋白;

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