结核分枝杆菌PE35在大肠杆菌中的可溶性表达及产物纯化

熊志红; 朱琰; 孙昌文; 庄玉辉; 程小星

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目的利用大肠杆菌表达系统大量获得重组的结核分枝杆菌PE35蛋白,并初步评估其在结核病血清学诊断方面的价值.方法用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv全基因组中获得PE35基因克隆到pET24b中,转化BL21(DE3)构建大肠杆菌表达株;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白及其表达方式;使用Ni-sepharose纯化蛋白;Western-blot检测结核病人血清的抗结核抗体.结果酶切鉴定和DNA序列分析显示构建了正确的pET-PE35原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21(DE3)中可溶性地表达分子量大小相符的重组蛋白.纯化后的蛋白纯度达到90%以上,能与结核病人血清抗体结合.结论成功地构建了pET-PE35原核表达载体,并获得较纯的重组PE35蛋白,此蛋白能检测结核病人血清抗体.为探讨PE35蛋白在结核病的基础研究与诊断运用奠定了基础.

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来源
《临床肺科杂志》 |2010年第12期|1709-1711|共3页
作者
熊志红; 朱琰; 孙昌文; 庄玉辉; 程小星;
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作者单位

100091,北京,解放军第309医院结核病研究室;

100091,北京,解放军第309医院结核病研究室;

100091,北京,解放军第309医院结核病研究室;

100091,北京,解放军第309医院结核病研究室;

100091,北京,解放军第309医院结核病研究室;

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正文语种 chi
中图分类内科学;
关键词
结核分枝杆菌; PE35; 可溶性表达; 纯化;

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