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池蝶蚌组织蛋白酶L1-like基因的克隆及表达特征分析

         
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为了解淡水贝类是否存在组织蛋白酶L的亚型及其亚型的免疫相关作用,本实验利用已构建的池蝶蚌血细胞全长cDNA文库,筛选获得与之同源的EST序列,结合RACE技术进一步克隆了池蝶蚌一个新的组织蛋白酶L基因的cDNA全长,命名为Hs CtsL1-like基因(GenBank登录号为KF015273).该序列全长为1280 bp,5’-非翻译区(5'UTR)为31 bp,3’-非翻译区(3'UTR)为256 bp,开放阅读框区(ORF)为993 bp,编码330个氨基酸,预测蛋白相对分子量为36.86 ku,理论等电点为6.23.序列分析结果显示,HsCtsL1-like与其他软体动物相对应序列具有共同结构特征,包含信号肽、前肽抑制域和成熟肽三部分,在其他物种中已鉴定的CtsL签名序列标签(ERF/WNIN、GNFD、GCXGG和QCHN等)在HsCtsL 1-like中均可找到.其氨基酸序列同缢蛏CtsL1 (AGL33704.1)同源性最高,达67％;与报道的三角帆蚌CtsL(ADV03094)和池蝶蚌中另一个CtsL(AEX88474)仅均为52.91％;系统进化分析表明,HsCtsL1-like与缢蛏、长牡蛎和合浦珠母贝的CtsL1聚为一分支,推测HsCtsL1-like属于CtsL家族中的亚型1.实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测显示,HsCtsL1-like mRNA在肝脏中表达量最高,其次是卵巢和精巢.注射鳗弧菌后,血细胞和肝脏HsCtsL 1-like mRNA转录水平显著升高,暗示其是一个免疫有关的基因,参与了池蝶蚌的先天免疫应答反应.

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