莱茵衣藻BBSome蛋白BBS2原核表达、纯化和多克隆抗体的制备及鉴定

董彬; 吴松; 程荣强; 孟德梅; 樊振川

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BBSome蛋白复合物是纤毛蛋白组分之一,BBSome组装或纤毛运输缺陷可导致巴-比二氏综合征.其中,BBSome组分BBS2缺失已被临床证明是导致BBS的病因之一.莱茵衣藻是研究BBSome组装和纤毛运输的一种很好的模式生物.为深入研究BBS2的致病机制,需要特异性识别其BBS2蛋白的抗体.本文将莱茵衣藻BBS2基因5'端399 bp的cDNA序列克隆到原核表达载体pET28a-bbs2,转入大肠杆菌BL21(DE3)细胞进行诱导表达.在8 mol/L尿素存在的情况下对该融合蛋白进行镍柱亲和纯化,并将纯化后的融合蛋白免疫新西兰大白兔.SDS-PAGE电泳结果表明:分子量为15 kDa的重组6×His-BBS2融合蛋白为水不溶性蛋白.5次免疫后的抗菜茵衣藻BBS2抗血清效价高达1∶256 000.经Protein A琼脂糖CL-4B亲和纯化后的抗血清不仅在Western blotting分析中能特异性识别莱茵衣藻BBS2,而且在免疫荧光染色分析中能精确定位BBS2于基体和纤毛内.这一多克隆抗体的成功制备为深入开展BBS2在BBSome组装和纤毛运输中的分子作用机制提供了基础.

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来源
《食品与生物技术学报》 |2019年第2期|145-152|共8页
作者
董彬; 吴松; 程荣强; 孟德梅; 樊振川;
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作者单位

天津科技大学食品工程与生物技术学院;

教育部食品营养与安全重点实验室;

天津300457;

天津科技大学食品工程与生物技术学院;

教育部食品营养与安全重点实验室;

天津300457;

天津科技大学食品工程与生物技术学院;

教育部食品营养与安全重点实验室;

天津300457;

天津科技大学食品工程与生物技术学院;

教育部食品营养与安全重点实验室;

天津300457;

天津科技大学新农村发展研究院;

天津300457;

天津科技大学食品工程与生物技术学院;

教育部食品营养与安全重点实验室;

天津300457;

天津科技大学新农村发展研究院;

天津300457;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
莱茵衣藻; 纤毛; BBS2; 原核表达; 蛋白纯化; 多克隆抗体;

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