川山茶ISSR-PCR及SSR-PCR优化体系建立及比较

刘家艳; 权俊萍; 沈薛洁; 卢娟芳; 田波; 陈启航

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以川山茶品种“茶睡莲”为试验材料,以改良CTAB法提取高质量DNA,采用正交设计L16(45),探讨了Mg2+、dNTPs、引物、TaqDNA聚合酶和模板DNA浓度对川山茶ISSR-PCR和SSR-PCR反应体系的影响.建立了相关优化体系:20 μL的ISSR-PCR扩增体系中含20 ng模板DNA,2L10× Buffer,2 mmol/L Mg2+,0.15 mmol/L dNTPs,0.6μmol/L引物和1 U TaqDNA聚合酶,扩增退火温度为55℃,35个循环;20 μL的SSR-PCR扩增体系中含50 ng模板DNA,2.5 mmol/LMg2+,0.05 mmol/L dNTPs,0.2μmol/L引物和0.5 U TaqDNA聚合酶,最佳退火温度为52℃,最佳循环数为38.应用该优化体系,分别用27个川山茶品种DNA进行了ISSR-PCR扩增和SSR-PCR扩增,结果显示,建立的优化体系具有较高稳定性.

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来源
《江苏林业科技》 |2016年第5期|1-7|共7页
作者
刘家艳; 权俊萍; 沈薛洁; 卢娟芳; 田波; 陈启航;
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作者单位

重庆市南山植物园管理处,重庆400065;

重庆市南山植物园管理处,重庆400065;

重庆市南山植物园管理处,重庆400065;

西南大学园艺园林学院,重庆400716;

重庆市南山植物园管理处,重庆400065;

重庆市南山植物园管理处,重庆400065;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类山茶;
关键词
川山茶; ISSR-PCR; SSR-PCR; 引物; 退火温度; TaqDNA聚合酶; 正交设计; 优化体系;

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