新型重组人内毒素结合肽突变体的构建及原核表达纯化

许成燕; 刘友生; 段光杰; 朱江; 徐小明

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新型重组人内毒素结合肽突变体的构建及原核表达纯化

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目的构建新型人内毒素结合肽（a new endotoxin binding peptide consisting of 25 amino acid residues，EBP25）及其突变体（mutant of EBP25，mEBP25）的原核表达重组质粒，并在大肠埃希菌中诱导表达。方法采用PCR法，扩增EBP25基因，构建pET-30-EBP25.融合表达载体并转化Ecoli DH5α扩增。重组质粒经酶切和测序鉴定后，应用快速定点突变法将EBP25第2位缬氨酸和第5位谷氨酰胺所对应碱基均替换成赖氨酸所对应的碱基，突变后重组质粒再经测序鉴定后，将二者转化至E．coli BL21（DE3）PlysS后经IPTG诱导表达，表达产物采用Western印迹进行鉴定后，用His—Tag亲和层析对融合蛋白进行纯化。结果两次测序结果显示人EBP25，和mEBP25重组序列和理论设计序列完全一致后，经IPTG诱导表达获得目的融合蛋白，通过SDS—PAGE电泳、Western印迹证实蛋白表达的特异性，并对蛋白进行纯化，获得EBP25和mEBP25融合蛋白。结论构建、表达纯化了EBP25和mEBP25融合蛋白，为进一步研究其中和内毒素／月旨多糖活性奠定了基础。

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来源
《医学分子生物学杂志》 |2010年第2期|131-135|共5页
作者
许成燕; 刘友生; 段光杰; 朱江; 徐小明;
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作者单位

第三军医大学西南医院病理学研究所;

重庆市400038;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
内毒素结合肽; 定点突变; 原核表达; 纯化;

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