MEKK3基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对胃腺癌AGS细胞MEKK3的表达抑制

钱凤英; 兰风华; 董荔红; 黄俏佳

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目的构建人MEKK3基因的小干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体表达载体，观察其在胃腺癌AGS细胞中对MEKK3的表达抑制。方法设计并合成针对人MEKK3基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列，以MluI及XhoI克隆入pRNAT—H1．1／Adeno穿梭载体中，得到的质粒用Pme I线性化后在大肠埃项菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组。卡那霉素筛选后，用PacI酶切鉴定。鉴定正确的质粒经Pac I酶切、乙醇沉淀后转染293A细胞，包装得到具有感染能力的pAd—MEKK3-siRNA重组腺病毒。病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞，Western印迹法检测其对MEKK3蛋白表达的抑制。结果酶切和洲序鉴定表明3个MEKK3 siRNA重组腺病毒表达载体正确无误。Western印迹检测结果显示3个pAd—MEKK3-siRNA重组腺病毒表达载体中有两个可有效地抑制胃腺癌AGS细胞中MEKK3基因的表达，其中以pAd．MEKK3-siRNA3的抑制作用最显著，有效率达89％。结论成功构建了针对MEKK3基因的siRNA重组腺病毒载体，为进一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS细胞中的作用和功能奠定了基础。

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来源
《医学分子生物学杂志》 |2011年第4期|334-339|共6页
作者
钱凤英; 兰风华; 董荔红; 黄俏佳;
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作者单位

南京军区福州总医院分子医学研究中心;

福州市350025;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类基因工程（遗传工程）;
关键词
腺病毒载体; 小干扰RNA; MEKK3基因;

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