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一种有效敲低原代B细胞中目的基因表达以快速鉴定基因功能方法的建立

         

摘要

B细胞介导的抗病毒体液免疫应答过程涉及大量基因的上调表达,为快速鉴定这些基因的功能,需在体外建立一种有效敲低B细胞中目的基因表达以研究基因功能的方法,但目前已有的方法转导效率较低且很少将B细胞转移到小鼠体内以观察其增殖和分化.本研究首先将Drosha酶特异性小分子干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)与反转录病毒包装质粒共转染至病毒包装细胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培养基中加入抗CD180抗体,构建了原代B细胞的体外培养体系,使B细胞在保持自身特性的同时具有较强的增殖能力;再次,增加离心感染(spin infection)次数,进一步提高了B细胞的转导效率;另外,通过小鼠预先感染,可收获更多增殖、分化的B细胞以供表型分析.通过上述改进措施,成功敲除了B细胞功能基因Bcl6的表达,验证了其抗凋亡功能.该方法的建立为研究病毒急、慢性感染中B细胞的增殖、分化与缺陷机制奠定了良好基础.

著录项

  • 来源
    《微生物与感染》 |2020年第4期|220-227|共8页
  • 作者单位

    复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系 教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 上海200032;

    复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系 教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 上海200032;

    复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系 教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 上海200032;

    复旦大学上海医学院基础医学院病原生物学系 教育部、卫健委、医科院医学分子病毒学重点实验室 上海200032;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 免疫细胞生物学;
  • 关键词

    B细胞; 基因功能; 反转录病毒; 短发夹核糖核酸; 转导;

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