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HMGB1 A盒与LBPK95A融合基因的构建和原核表达

         

摘要

目的 克隆、表达高迁移率族蛋白1 A盒(HMGB1 A box)与LBPK95A的融合基因.方法 经加端-PCR获得HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.该基因克隆到pGEX-4T-2载体中转化TOP10感受态细胞,测序鏊定.将A-LBP质粒转化E.coli BL21,30℃诱导表达4 h,超声裂解后经GSTrap FF蛋白纯化柱纯化,进行SDS-PAGE分析.结果 DNA测序证明,获得了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合基因.SDS-PAGE分析表明,A-LBP融合蛋白在原核中获得高效表达,表达量约占菌体总蛋白的28%,GSTrap FF纯化后获得目的蛋白.结论 成功表达和纯化了HMGB1 A盒与LBPK95A的融合蛋白.

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