寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株

严振亚; 柴美霞; 张青; 骆希; 尚广东

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寡核苷酸介导的重组工程法构建容纳毒性基因ccdB的新型菌株

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毒性基因ccd B是最为常用的一种负筛选标记,ccd B基因和R6K复制子一起组成了高效的基因克隆和基因组修饰的遗传操作元件.为获得高转化效率的容纳ccd B基因的菌株,本研究采用重组工程手段,以经优化去除了错配修复的寡核苷酸与p UC骨架、含有ccd B基因的质粒p MK2010共转化,直接对含pir116基因型的大肠杆菌DH10B衍生菌株的基因组进行修饰.在筛选的10个菌株中,7个为预期的Gyr A462基因型.为消除p MK2010,构建了一个p UC骨架、氨苄青霉素抗性的诱导自剪切质粒p LS2750.p LS2750通过质粒不相容性去除p MK2010后,经诱导I-Sce I自剪切而消除.所得菌株LS027的电转化效率为6.9×10~8/mg,是对照菌株的约100倍,R6K质粒呈现高拷贝.以LS027为宿主菌的构建了系列克隆载体,以只进行基因克隆可避免载体自连的干扰.新型ccd B基因容纳菌株LS027有着基因操作方面广泛运用的潜力.

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来源
《南京师大学报：自然科学版》 |2016年第2期|66-72|共7页
作者
严振亚; 柴美霞; 张青; 骆希; 尚广东;
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作者单位

南京师范大学生命科学学院;

江苏省微生物工程技术研究中心;

江苏省微生物与功能基因组学重点实验室;

江苏南京210023;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类生物工程应用;
关键词
ccd; B; R6K; 寡核苷酸; 重组工程;

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