聚乙二醇诱导鸡红细胞融合实验方案的优化

李玲; 刘欢; 贺亚玲; 崔林; 唐慧; 张君; 张亮

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聚乙二醇诱导鸡红细胞融合实验方案的优化

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目的:聚乙二醇(PEG)介导的细胞融合法是最为经济、简单的细胞融合技术,但受多种因素影响,实际实验效果并不理想,为获得高效稳定的细胞融合效率,本研究拟对PEG诱导的鸡红细胞的融合实验进行优化.方法:调整鸡红细胞的采集与保存方式、细胞浓度、缓冲系统(GKN与1640)、pH、诱导与孵育时间,以及染液的选择等.结果:弱碱PEG环境(pH≈7.8)下诱导与孵育时间均采用5min时,细胞融合率最高(17.87％),显著高于未调节pH组及诱导与孵育时间20min组(P＜0.01);pH＞8时,细胞聚集但胞膜皱缩破裂,计算融合率困难;亚甲基蓝、中性红染色时间＞20min时,细胞膜亦皱缩破裂.结论:宜选择肝素类抗凝管采集及保存鸡血,在GKN或1640缓冲系统中,以全血与试剂1:9比例洗涤及孵育,弱碱PEG环境(pH≈7.8)分别诱导、孵育5min,并在20 min内观察亚甲基蓝或中性红染色结果,该方案适宜应用于PEG诱导的鸡红细胞融合实验教学.

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来源
《农垦医学》 |2020年第2期|164-169|共6页
作者
李玲; 刘欢; 贺亚玲; 崔林; 唐慧; 张君; 张亮;
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作者单位

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

石河子大学医学院新疆石河子 832002;

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原文格式 PDF
正文语种 chi
中图分类实验;遗传学实验（实验遗传学）、实验方法及设备;
关键词
聚乙二醇; 细胞融合; 鸡红细胞; 缓冲体系; pH; 时间; 染色剂;

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