表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建

程晓亮; 林文耀; 叶煜; 陈筱薇; 严常燕; 廖明; 樊惠英

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表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建

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利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子,gp64及dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-V,得到重组质粒pFastBac-dCap-V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞,获得的重组穿梭质粒Bacmid-dCap-V,经脂质体转染St9细胞,获得重组杆状病毒Ac-dCap-V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达dCap蛋白.%The open capsid(Cap)protein gene without nuclear localization signal (NLS) of porcine circo-virus 2(PCV2)was amplified by PCR and sub-cloned into pBACsurf-1 between the upstream gp64 signal sequence and downstresm gp64 mature domain. The fusion gene containing dCap and gp64 was inserted into pcDNA3.1 ( + ) to construct the recombinant plasmid pcDNA3. L-gp64-dCap. A fragment of the CMV promoter-gp64-dCap fusion gene cassette was excised from pcDNA3. L-gp64-dCap and inserted into the baculovirus transfer vector pFastBac-V to construct the recombinant plasmid pFastBac-dCap-V. It was followed by the transformation of plasmid into Escherichia coli DHlOBac competent cells to obtain the recombinant shuttle vector Bacmid-dCap-V. Eventually, the recombinant Bacmid was transfected into Sf9 cells to produce the recombinant baculovirus Ac-dCap-V using the LipofectamineTM 2000. The Sf9 cells produced cytopathic after infection of recombinant baculoviruses Ac-dCap-V. Indirect immunofluoresent assay demonstrated that the Ac-dCap-V efficiently transducted the mammalian cells in vitro and the dCap protein was expressed successfully.

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来源
《华南农业大学学报》 |2011年第4期|96-100|共5页
作者
程晓亮; 林文耀; 叶煜; 陈筱薇; 严常燕; 廖明; 樊惠英;
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作者单位

华南农业大学兽医学院;

农业部动物疫病防控重点实验室;

广东广州510642;

华南农业大学兽医学院;

农业部动物疫病防控重点实验室;

广东广州510642;

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正文语种 chi
中图分类家畜病毒学;
关键词
杆状病毒表面展示系统; 猪圆环病毒2型; dCap基因;

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