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铽-钛铁试剂络合物荧光探针研究脱氢酶

         

摘要

报道了Tb3+ - TR络合物探针用于研究脱氢酶,并建立了3种典型脱氢酶的定量测定方法,测定乙醇脱氢酶(ADH)、苹果酸脱氢酶(MDH)和葡糖- 6 -磷酸脱氢酶(G 6 PDH)的线性范围分别为: 2. 14×10-6 ~5. 50×10-5 g/mL、4. 17×10-6 ~1. 03×10-4 g/mL和5. 02×10-6 ~3. 51×10-5 g/mL;检测限分别为: 1. 02×10-7 g/mL、5. 32×10-7 g/mL和1. 25×10-6 g/mL.研究结果表明,Tb3+ TR络合物除可以作为脱氢酶定量测定的灵敏探针外,还可以用作指示乙醇脱氢酶(ADH)热变性过程的灵敏探针,探测结果显示ADH的热变性过程在50~60℃有一突变,从另一角度阐明了ADH的热变性过程不是长期以来一直认为的“全或无”的过程,而是一个构象渐变的过程.由于ADH分子是由酶蛋白和NAD+组成的全酶,其变性失活过程,除了与酶蛋白有关以外,还与NAD+有关.利用Tb3+ - TR络合物荧光探针可以较灵敏地监测到这一点.

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