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转录因子Krüpple样因子7对新生大鼠海马神经元缺血再灌注损伤的影响

         

摘要

目的 探讨转录因子Krüpple样因子7(KLF7)对新生大鼠海马神经元缺血再灌注损伤的影响.方法 取新生Sprauge-Dawley大鼠海马组织制备海马神经元单细胞悬液,按每孔1×106个细胞接种于聚赖氨酸包被6孔细胞培养板,细胞贴壁继续培养7d后分为正常组、氧糖剥夺/复氧(OGD/R)组和OGD/R+ KLF7组.正常组培养7d的原代大鼠海马神经元按每孔1×106个细胞于含胎牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养,置于含体积分数5%CO2的培养箱中37℃下培养3d;OGD/R组培养7d的原代大鼠海马神经元用磷酸盐缓冲液洗3次,用移液器将原培养液置换为无糖平衡盐溶液,置于三气缺氧细胞培养箱(体积分数1%O2、94% N2、5% CO2)中37℃下培养4h,然后应用4.5 g·L-1葡萄糖培养基代替无糖平衡盐溶液,置于含体积分数5% CO2的常温培养箱中培养24 h;OGD/R+KLF7组培养成功的OGD/R模型细胞加入Lenti-KLF7慢病毒进行转染,置于含体积分数5% CO2的培养箱中37℃下孵育3d.应用倒置相差显微镜观察各组海马神经元的生长状态,实时荧光定量聚合酶链反应检测各组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bcl-2和Bax mRNA表达,细胞计数试剂盒检测各组细胞活性,Hoechst33342/磺化丙啶双染法检测各组细胞凋亡情况.结果 3组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量比较差异均有统计学意义(F=237.702、24.031、476.505、112.900、89.467,P<0.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞中KLF7、NGF、Caspase-3、Bax和Bcl-2 mRNA相对表达量显著高于正常组(P<0.05);OGD/R+ KLF7组细胞中KLF7、NGF和Bcl-2mRNA相对表达量显著高于OGD/R组(P<0.05),Caspase-3和Bax mRNA相对表达量显著低于OGD/R组(P<0.05).正常组、OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性分别为1.080±0.090、0.499±0.049和0.727±0.115,3组细胞活性比较差异有统计学意义(F=42.710,P<0.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞活性显著低于正常组(P<0.05),OGD/R+ KLF7组细胞活性显著高于OGD/R组(P<0.05).正常组、OGD/R组、OGD/R+KLF7组细胞凋亡率分别为(40.6±6.3)%、(76.7±4.3)%和(58.5±4.4)%,3组细胞凋亡率比较差异有统计学意义(F=36.822,P<O.05);OGD/R组和OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著高于正常组(P<0.05),OGD/R+KLF7组细胞凋亡率显著低于OGD/R组(P<0.05).结论 KLF7对OGD/R诱导的海马神经元缺血再灌注细胞损伤具有保护作用,其机制可能与介导NGF表达,进而调控Caspase-3、Bcl-2和Bax细胞凋亡信号通路有关.

著录项

  • 来源
    《新乡医学院学报》 |2019年第3期|213-217223|共6页
  • 作者单位

    阜新市中心医院神经内科;

    辽宁阜新123000;

    牡丹江医学院解剖学教研室;

    黑龙江牡丹江157011;

    牡丹江医学院神经组织工程研究所;

    黑龙江 牡丹江 157011;

    牡丹江医学院解剖学教研室;

    黑龙江牡丹江157011;

    牡丹江医学院神经组织工程研究所;

    黑龙江 牡丹江 157011;

    牡丹江医学院解剖学教研室;

    黑龙江牡丹江157011;

    牡丹江医学院神经组织工程研究所;

    黑龙江 牡丹江 157011;

    牡丹江医学院;

    黑龙江 牡丹江157011;

    牡丹江医学院解剖学教研室;

    黑龙江牡丹江157011;

    牡丹江医学院神经组织工程研究所;

    黑龙江 牡丹江 157011;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 神经生理学;
  • 关键词

    Krüpple样因子7; 缺血再灌注损伤; 海马神经元; 凋亡;

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