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大鼠热休克蛋白70的融合表达及纯化鉴定

         

摘要

目的:在大肠杆菌中高效表达并纯化大鼠热休克蛋白(HSP)70与麦芽糖结合蛋白(MBP)的融合蛋白,以进一步研究细胞外HSP70的生物学功能.方法:用RT-PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到原核表达载体pMAL-c2X中,酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21,用IPTG在不同温度及时间下进行诱导表达,建立最佳诱导表达条件;采用Amylose树脂预装柱对目的蛋白进行亲和纯化,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE及Western blot分析.结果:克隆出目的基因,构建了融合表达载体pMAL-c2X/hsp70;诱导表达后经SDS-PAGE检测表明获得了目的条带,并纯化出纯度较高的融合蛋白;免疫印迹鉴定表明其具有抗原活性.结论:在大肠杆菌中高效表达并纯化了融合蛋白MBPHSP70,为进一步研究细胞外HSP70的生物学效应提供了有用的材料.

著录项

  • 来源
    《生物技术通讯》 |2008年第2期|159-162|共4页
  • 作者单位

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

    华北煤炭医学院,预防医学系,河北,唐山,063000;

    华北煤炭医学院,预防医学系,河北,唐山,063000;

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

    军事医学科学院,卫生学环境医学研究所,天津,300050;

  • 原文格式 PDF
  • 正文语种 chi
  • 中图分类 基因工程(遗传工程);
  • 关键词

    热休克蛋白70; 融合表达; 纯化;

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