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高山被孢霉ATCC32222中细胞色素b5还原酶Ⅰ的克隆、表达和功能鉴定

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[目的]鉴定产油微生物高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶Ⅰ的功能.[方法]将高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b5还原酶Ⅰ基因与人可溶性细胞色素b5还原酶基因序列比对,去除该基因N端穿膜区域后,与人可溶性细胞色素b5基因分别在大肠杆菌中异源表达;通过钴离子亲和层析、离子交换和分子排阻色谱等方法对表达产物进行纯化;以2,6-二氯靛酚钠(DCIP)为底物,测定细胞色素b5还原酶Ⅰ的体外活性及其对NADH和NADPH的偏好性;在反应体系中存在NADH时,通过全波长扫描方法检测细胞色素b5还原酶Ⅰ与细胞色素b5的相互作用.[结果]高山被孢霉ATCC 32222中膜结合细胞色素b5还原酶Ⅰ被成功可溶表达,经纯化后检测到体外活性:使用NADH时酶活为564.57 U,使用NADPH时为51.97 U;在NADH存在时,细胞色素b5还原酶Ⅰ能够还原细胞色素b5,其吸收峰从411 nm偏移至422 nm,并在521 nm和554 nm处吸光值增加.[结论]细胞色素b5还原酶ⅠN端穿膜区域的去除增加了其可溶性,并保持了蛋白质活性;高山被孢霉ATCC 32222中细胞色素b5还原酶Ⅰ基因编码的是一种NADH-细胞色素b5还原酶,其在体外能与细胞色素b5相互作用.

著录项

来源
《微生物学通报》 |2016年第10期|2172-2178|共7页
作者
王明轩; 陈海琴; 顾震南; 陈卫; 陈永泉;
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作者单位

江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122;

江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122;

江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122;

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江南大学食品学院食品科学与技术国家重点实验室江苏无锡214122;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
细胞色素b5还原酶; 细胞色素b5; 高山被孢霉; 脂肪酸脱饱和反应;

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