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特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质

         
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摘要

[目的]在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究.[方法]利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ的cDNA.将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115.[结果]SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达.重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70℃,且在65℃以下具有较好的热稳定性.最适反应pH为6.5,在pH 6.0-7.0之间有较好的稳定性.[结论]用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础.%Abstract: [Objective] The purpose was to clone and express endo-l,4-β-glucanase gene of Humicola insolens in Pichia pastoris expression system. [Methods] An endo-l,4-β-gluca-nase Ⅱ (eg Ⅱ) cDNA gene was isolated from the fungus Humicola insolens NC3 by RT-PCR. Subsequently, we cloned the eg Ⅱgene into expression vector pPIC9K, and then transformed into Pichia pastoris GS115. [Results] SDS-PAGE and CMC enzyme activity analysis demonstrated that recombinant EG Ⅱ protein was successfully expressed after induction in shake flasks. The endo-l,4-β-glucanase exhibited maximum activity at 70 ℃ and pH 6.5, and was stable between pH 6.0 and 7.0 and below 65℃ . [Conclusion] P. Pastoris expression system is an efficient way of production of endo-l,4-β-glucanase. The recombinant endo-l,4-β-gluca-nase could be a candidate for industrial applications.

著录项

  • 来源
    《微生物学通报》 |2012年第2期|145-153|共9页
  • 作者

    郑海英; 黄平; 蔡少丽; 柯崇榕; 林国滟; 黄建忠;

  • 作者单位

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

    福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心生命科学学院 福建省现代发酵技术工程研究中心 福建 福州 350108;

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  • 正文语种 chi
  • 中图分类
  • 关键词

    中性内切葡聚糖酶Ⅱ; 特异腐质霉; 毕赤酵母;

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