P197E与ep8叠加突变对扩展青霉脂肪酶热稳定性的影响

刘燕雅; 黄平; 司圣乾; 陈彦; 林琳

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为提高脂肪酶的热稳定性,作者利用重叠延伸PCR对扩展青霉脂肪酶(PEL)基因进行了体外定点突变,构建了P197E(即将第197位的脯氨酸突变为谷氨酸)与随机突变体ep8叠加突变的重组质粒pPIC3.5K-ep8-P197E.将该质粒电转化至毕赤酵母Pichia pastoris GS115中.进行异源表达.与野生型酶和单点突变酶PEL-ep8的酶学性质比较,结果表明:叠加突变体PEL-ep8-P197E在40℃温育处理30 min后,残余酶活分别比野生型PEL和随机突变体PEL-ep8提高了42.13%和37.3%.叠加突变体PEL-ep8-P197E的Tm值为41.51℃,比野生型酶PEL提高了2.81℃,比随机突变体脂肪酶PEL-ep8提高了2.25℃.通过对脂肪酶PEL的叠加突变,提高了该酶的热稳定性,并为结构与功能的进一步研究提供了材料.

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来源
《微生物学通报》 |2010年第2期|161-165|共5页
作者
刘燕雅; 黄平; 司圣乾; 陈彦; 林琳;
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作者单位

福建师范大学生命科学学院,福建福州350108;

福建师范大学生命科学学院,福建福州350108;

福建师范大学生命科学学院,福建福州350108;

福建师范大学生命科学学院,福建福州350108;

福建师范大学生命科学学院,福建福州350108;

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正文语种 chi
中图分类
关键词
扩展青霉脂肪酶; 叠加突变; 热稳定性;

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