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五味子素A通过HIF-1α/CXCR4信号通路抑制结直肠癌的生长并诱导细胞凋亡和保护性自噬

         
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目的 研究五味子素A对结直肠细胞凋亡与自噬的影响,以及对小鼠结直肠癌生长的作用与机制研究.方法 通过CCK-8、Annexin V-FITC/PI与Hoechst33342染色检测不同浓度(0、12.5、25、50μmol/L)的五味子素A对小鼠结直肠癌MCA38细胞存活与凋亡的影响;将mRFP-GFP-LC3质粒转染到MCA38细胞,并使用不同浓度(0、12.5、25、50μmol/L)的五味子素A作用后检测细胞自噬情况;荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)分别检测缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、趋化因子受体4(CXCR4)在mRNA与蛋白水平上的表达;将16只雌性裸鼠随机分为对照组和治疗组,每组8只,通过注射MCA38细胞构建结直肠癌小鼠模型,肿瘤长出时开始给药,治疗组小鼠每隔一天腹膜内注射五味子素A(80 mg/kg),对照组小鼠同时腹膜内注射PBS缓冲液,持续4周.在治疗后第7、10、13、16、19、22、25和28天使用游标卡尺测量肿瘤的大小,28d后HE染色观察肿瘤组织.结果 与对照组(0μmol/L)比较,不同浓度的五味子素A处理后细胞活力受到抑制(P<0.05),细胞凋亡数目增加(P<0.05),促进了细胞的自噬,下调了细胞中HIF-1α、CXCR4 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.05),且均呈剂量依赖性.经过五味子素A治疗后,小鼠肿瘤在治疗16d后体积明显变小(P<0.05),肿瘤病理切片显示肿瘤细胞减少.结论 五味子素A能够抑制小鼠结直肠癌的生长,促进结直肠细胞发生凋亡及保护性自噬,其作用可能与抑制HIF-1α/CXCR4信号通路相关.

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