双峰驼FCGRT基因的原核表达及多克隆抗体的制备

刘丽萍; 火兴民; 谢飞; 张旺东; 吴秀萍; 李瑞; 陆佳; 王雯慧

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双峰驼FCGRT基因的原核表达及多克隆抗体的制备

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为制备抗双峰驼FcRn的抗体,首先从NCBI收录的双峰驼FCGRT基因序列中选取编码区,经跨膜结构和信号肽预测分析,截取不含信号肽的膜外序列并构建重组质粒pET-28a-FcRn,然后在大肠埃希氏菌BL21(DE3)中用IPTG诱导表达及表达条件优化,用纯化后的FcRn重组蛋白免疫家兔,制备抗双峰驼FcRn的多克隆抗体,并通过间接ELISA和Western blot检测效价及其特异性.结果表明,获得的FcRn重组蛋白与预期大小一致(34 ku),且以包涵体形式表达,其最佳IPTG诱导浓度为0.3 mmol/L,诱导时间为6 h.ELISA检测抗体效价为1:32000,Western blot鉴定该抗体能与重组蛋白发生特异性结合.说明已成功制备了高效价和特异性良好的兔抗双峰驼FcRn多克隆抗体.

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来源
《动物医学进展》 |2021年第4期|39-43|共5页
作者
刘丽萍; 火兴民; 谢飞; 张旺东; 吴秀萍; 李瑞; 陆佳; 王雯慧;
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作者单位

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

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甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

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正文语种 chi
中图分类基因工程的应用;
关键词
双峰驼; FCGRT基因; FcRn重组蛋白; 原核表达; 多克隆抗体;

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