双峰驼IgM部分重链的原核表达及其多克隆抗体的制备

李敏; 王雯慧; 吴秀萍; 张旺东; 张亮; 何晚红; 李建飞; 李瑞; 火兴民; 刘丽萍

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cqvip:为获取双峰驼免疫球蛋白M(IgM)重链恒定区的表达产物及抗体,首先在GenBank找出收录的双峰驼IgM、IgA、IgE、IgG重链恒定区基因序列,比对IgM与IgA、IgE和IgG的氨基酸序列,选取一段差异较大的蛋白序列片段,转换成相对应的基因片段,PCR扩增选取的基因片段,插入pET-28a(+)载体构建重组载体,转化进大肠埃希菌BL21,并诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE鉴定重组蛋白,后利用纯化的蛋白免疫家兔,制备抗血清,ELISA和Western blot鉴定获得的血清。结果显示,成功构建了载体pET-28a-IgM,诱导表达的目的蛋白分子质量为18.7 ku,与预期相符。ELISA方法检测抗血清效价为1∶32000,Western blot结果显示该血清能特异性识别原核表达蛋白,说明双峰驼IgM兔抗血清的成功制备。

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来源
《动物医学进展》 |2020年第4期|33-37|共5页
作者
李敏; 王雯慧; 吴秀萍; 张旺东; 张亮; 何晚红; 李建飞; 李瑞; 火兴民; 刘丽萍;
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作者单位

甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州 730070;

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正文语种 chi
中图分类家畜免疫学;
关键词
双峰驼; 免疫球蛋白M; 原核表达; 抗体制备;

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