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酿酒酵母总蛋白的提取及其耐核苷类药物表达特性分析

         

摘要

建立了一种简便适用于从真核细胞酿酒酵母菌中提取总蛋白的方法,应用该方法探索了两株对核苷类药物5-FC高耐受菌株的蛋白表达特性.实验中以细胞破碎率和总蛋白浓度为主要检测指标,对比分析了6种酵母细胞破碎方法,即液氮研磨、超声波破碎、酸洗玻璃珠法、酶法、反复冻融法、TNBIO高压细胞破碎,通过比色法测定了总蛋白的含量,发现改进后的酸洗玻璃珠法的细胞破碎率为81.25%,总蛋白含量152.67 mg/mL,效果明显优于其他几种方法.实验表明,在裂解液中添加适量的PMSF等蛋白酶抑制剂,可以有效防止蛋白的降解.经过SDS-PAGE对核苷类药物高耐药性菌株酵母总蛋白表达特性分析,酸洗玻璃珠法提取的蛋白含量高,所含杂质少,条带比较多且清晰,其中相对分子质量约为21 kDa和43kDa的蛋白有明显的表达差异,可能与菌株细胞的耐药性相关.

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