微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

张桂芝; 武彬; 井庆川; 刘辉; 石天虹; 刘雪兰; 魏祥法; 刘瑞亭

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微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

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以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列.测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别.将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P. pastoris GS115/pPIC9K-mcp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/ml、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-mcp-03.用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/ml,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带.

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来源
《山东农业科学》 |2009年第11期|1-415|共5页
作者
张桂芝; 武彬; 井庆川; 刘辉; 石天虹; 刘雪兰; 魏祥法; 刘瑞亭;
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作者单位

山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023;

山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023;

山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023;

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山东省农业科学院家禽研究所,山东,济南,250023;

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正文语种 chi
中图分类基因的表达;
关键词
凝乳酶; 毕赤酵母; 克隆; 表达;

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