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水貂生长激素cDNA的克隆与序列分析

         

摘要

从水貂脑垂体中分离提取总RNA,经过RT-PCR分别扩增出水貂生长激素前体肽和成熟肽cDNA.PCR产物经凝胶回收纯化,克隆到载体pGEM-T,然后转化感受态细胞DH5α.在含X-gal、IPTG的LB(Amp+)平板上筛选阳性克隆,提取质粒作限制性酶切鉴定后,对目的片段进行测序.结果表明,RT-PCR扩增出的2个cDNA片段碱基数分别为713bp和780bp,用DNAsis 2.5软件进行分析表明,此扩增序列与GenBank中发表的水貂生长激素cDNA 100%相同.前体肽编码区由651bp组成,编码216个氨基酸,包括长度为29个氨基酸的信号肽;成熟肽的开放阅读框全长564bp,编码187个氨基酸,分子量约为21kDa.通过Blast比对,分析了与人、马、牛、猪、山羊、绵羊、猫、狗、大鼠和小鼠生长激素核苷酸序列的同源性.

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