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桂枝茯苓丸逆转lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路治疗子宫内膜癌机制研究

         
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目的 探究桂枝茯苓丸对子宫内膜癌Ishikawa细胞的作用和调控机制.方法 进行实时定量PCR(qRT-PCR)检测lncRNA H19在人正常子宫内膜细胞EMC和子宫内膜癌细胞HEC-1A、HEC-1B、Ishikawa细胞表达.向Ishikawa细胞转染sh-H19,利用细胞计数试剂盒8(CCK8)检测细胞生长活力,流式细胞术评估细胞凋亡率,qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blot)分析自噬标志蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达.采用双荧光素酶报告基因检测验证lncRNA H19与miR-195-5p及miR-195-5p与SGK1的靶向结合关系.将oe-H19转染到Ishikawa细胞,并将转染oe-H19的Ishikawa细胞在桂枝茯苓丸含药培养液中培养.qRT-PCR检测lncRNA H19表达,CCK8、流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,Western blot检测自噬相关蛋白P62、Beclin1和LC3II的表达.结果 与人正常子宫内膜细胞EMC(1.00±0.09)比较,lncRNA H19在子宫内膜癌细胞HEC-1A(1.73±0.13)、HEC-1B(2.12±0.14)、Ishikawa(3.18±0.16)表达显著升高(P<0.05或P<0.01).与对照组比较,下调lncRNA H19使子宫内膜癌细胞增殖活性显著降低[(45.00±3.95)％比(100.00±8.12)％,P<0.05],细胞凋亡率明显升高[(10.06±1.12)％比(5.35±0.55)％,P<0.05].敲减lncRNA H19的子宫内膜癌细胞P62表达显著降低,Beclin1和LC3II表达显著上调.双荧光素酶报告基因检测和West-ern blot结果表明,lncRNA H19靶向负调控miR-195-5p表达,miR-195-5p靶向抑制SGK1表达.在挽救实验中,与oe-NC组(1.00±0.09)比较,oe-H19组(3.23±0.29)Ishikawa细胞lncRNA H19含量显著增高(P<0.01),而桂枝茯苓丸能够逆转oe-H19转染引起的lncRNA H19水平上升(1.14±0.12)(P<0.05).oe-H19组[(240.00±15.89)％]细胞存活率较oe-NC组[(100.00±7.88)％]显著增高(P<0.05),转染oe-H19后的Ishikawa细胞经桂枝茯苓丸含药培养液处理后,其存活率明显降低(92.00±8.47)％(P<0.05).oe-H19转染提高Ishikawa细胞P62表达,抑制Beclin1和LC3II表达,经桂枝茯苓丸含药培养液处理,Ishikawa细胞P62 Beclin1和LC3II表达部分恢复.结论 桂枝茯苓丸具有抗子宫内膜癌活性,其作用机制可能是抑制lncRNA H19介导的miR-195-5p/SGK1通路,进而抑制子宫内膜癌细胞的增殖,促进细胞自噬.

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