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Molecular Test to Assign Individuals within the Cacopsylla pruni Complex

机译：分子测试以分配Cacopsylla中的个体 普鲁尼情结

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摘要

Crop protection requires the accurate identification of disease vectors, a task that can be made difficult when these vectors encompass cryptic species. Here we developed a rapid molecular diagnostic test to identify individuals of Cacopsylla pruni (Scopoli, 1763) (Hemiptera: Psyllidae), the main vector of the European stone fruit yellows phytoplasma. This psyllid encompasses two highly divergent genetic groups that are morphologically similar and that are characterized by genotyping several microsatellite markers, a costly and time-consuming protocol. With the aim of developing species-specific PCR primers, we sequenced the Internal Transcribed Spacer 2 (ITS2) on a collection of C . pruni samples from France and other European countries. ITS2 sequences showed that the two genetic groups represent two highly divergent clades. This enabled us to develop specific primers for the assignment of individuals to either genetic group in a single PCR, based on ITS2 amplicon size. All previously assigned individuals yielded bands of expected sizes, and the PCR proved efficient on a larger sample of 799 individuals. Because none appeared heterozygous at the ITS2 locus (i.e., none produced two bands), we inferred that the genetic groups of C . pruni , whose distribution is partly sympatric, constitute biological species that have not exchanged genes for an extended period of time. Other psyllid species (Cacopsylla, Psylla, Triozidae and Aphalaridae) failed to yield any amplicon. These primers are therefore unlikely to produce false positives and allow rapid assignment of C. pruni individuals to either cryptic species.
机译：作物保护需要准确识别病媒，而当这些病媒包含隐性物种时，这项任务将变得困难。在这里，我们开发了一种快速的分子诊断测试方法，用于鉴定欧洲核果黄色果肉质原体的主要载体-番茄小角藻（Cocopsylla pruni）（Scopoli，1763）（半翅目：Psyllidae）。该木虱包含两个在形态上相似的高度不同的遗传基团，其特征在于对几种微卫星标记进行基因分型，这是一种昂贵且费时的方案。为了开发物种特异性PCR引物，我们在C的集合上对内部转录间隔区2（ITS2）进行了测序。来自法国和其他欧洲国家的pruni样品。 ITS2序列显示这两个基因组代表两个高度不同的进化枝。这使我们能够基于ITS2扩增子大小，在单个PCR中开发出特定的引物，用于将个体分配给任一遗传组。所有先前分配的个体均产生了预期大小的条带，PCR证明对799个个体的较大样本有效。因为没有一个在ITS2位点出现杂合（即没有一个产生两个条带），所以我们推断C的遗传基团。 pruni （其分布部分是同伴的）构成了长时间不交换基因的生物物种。其他木虱种类（ Cacopsylla ， Psylla ， Triozidae 和Aphalaridae）未能产生任何扩增子。因此，这些引物不太可能产生假阳性，并允许快速分配 C 。 pruni 属于任何一种神秘物种的人。

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