• 主题
高级搜索  >
历史搜索 清空历史
首页> 美国卫生研究院文献>Molecular Therapy. Methods Clinical Development >Creation of a High-Yield AAV Vector Production Platform in Suspension Cells Using a Design-of-Experiment Approach
【2h】

Creation of a High-Yield AAV Vector Production Platform in Suspension Cells Using a Design-of-Experiment Approach

机译：使用实验设计方法在悬浮电池中创建高产AAV矢量生产平台

代理获取
本网站仅为用户提供外文OA文献查询和代理获取服务，本网站没有原文。下单后我们将采用程序或人工为您竭诚获取高质量的原文，但由于OA文献来源多样且变更频繁，仍可能出现获取不到、文献不完整或与标题不符等情况，如果获取不到我们将提供退款服务。请知悉。
页面导航
  • 摘要
  • 著录项
  • 相似文献
  • 相关主题

摘要

Recombinant adeno-associated virus (rAAV) vectors are a leading gene delivery platform, but vector manufacturing remains a challenge. New methods are needed to increase rAAV yields and reduce costs. Past efforts to improve rAAV production have focused on optimizing a single variable at a time, but this approach does not account for the interactions of multiple factors that contribute to vector generation. Here, we utilized a design-of-experiment (DOE) methodology to optimize rAAV production in a HEK293T suspension cell system. We simultaneously varied the transgene, packaging, and helper plasmid ratios, the total DNA concentration, and the cell density to systematically evaluate the impact of each variable across 52 conditions. The results revealed a unique set of parameters with a lower concentration of transgene plasmid, a higher concentration of packaging plasmid, and a higher cell density than previously described protocols. Using this DOE-optimized protocol, we achieved unpurified yields approaching 3 × 1014 viral genomes (VGs)/L of cell culture. Additionally, we incorporated polyethylene glycol (PEG)-based virus precipitation, pH-mediated protein removal, and affinity chromatography to our downstream processing, enabling average purified yields of >1 × 1014 VGs/L for rAAV-EGFPs across 13 serotypes and capsid variants.
机译：重组腺相关病毒（RAAV）载体是一种主要的基因递送平台，但是矢量制造仍然是一个挑战。需要新的方法来增加rav产量并降低成本。过去努力改善rAAV生产的努力集中于一次优化一个变量，但这种方法不会考虑有助于向量生成的多种因素的相互作用。在这里，我们利用了实验设计（DOE）方法，以优化HEK293T悬架细胞系统中的RAAV生产。我们同时改变转基因，包装和辅助质粒比，总DNA浓度和细胞密度，以系统地评估每个变量在52条条件下的影响。结果揭示了一种独特的参数，具有较低浓度的转基质质粒，浓度浓度较高的包装质粒，并且比先前描述的方案更高的细胞密度。使用这种DOE优化的方案，我们实现了无纯化的产量接近3×1014病毒基因组（VGS）/ L细胞培养物。此外，我们将聚乙二醇（PEG）的病毒沉淀，pH介导的蛋白质除去和亲和层析掺入我们的下游加工，从而在13个血清型和衣壳变体上实现了rAAV-EGFP的平均纯化产率> 1×1014 Vgs / L. 。

著录项

相似文献

  • 外文文献
  • 中文文献
  • 专利
代理获取

客服邮箱：kefu@zhangqiaokeyan.com

京公网安备：11010802029741号 ICP备案号：京ICP备15016152号-6 六维联合信息科技 (北京) 有限公司©版权所有

  • 客服微信

  • 服务号