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Systematic analysis of human telomeric dysfunction using inducible telosome/shelterin CRISPR/Cas9 knockout cells

机译：使用诱导性端粒/ shelterin CRISPR / Cas9敲除细胞对人端粒功能障碍进行系统分析

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CRISPR/Cas9 technology enables efficient loss-of-function analysis of human genes using somatic cells. Studies of essential genes, however, require conditional knockout (KO) cells. Here, we describe the generation of inducible CRISPR KO human cell lines for the subunits of the telosome/shelterin complex, TRF1, TRF2, RAP1, TIN2, TPP1 and POT1, which directly interact with telomeres or can bind to telomeres through association with other subunits. Homozygous inactivation of several subunits is lethal in mice, and most loss-of-function studies of human telomere regulators have relied on RNA interference-mediated gene knockdown, which suffers its own limitations. Our inducible CRISPR approach has allowed us to more expediently obtain large numbers of KO cells in which essential telomere regulators have been inactivated for biochemical and molecular studies. Our systematic analysis revealed functional differences between human and mouse telomeric proteins in DNA damage responses, telomere length and metabolic control, providing new insights into how human telomeres are maintained.
机译：CRISPR / Cas9技术可使用体细胞对人类基因进行有效的功能丧失分析。然而，必需基因的研究需要条件敲除（KO）细胞。在这里，我们描述了针对端粒/ shelterin复合体的亚基TRF1，TRF2，RAP1，TIN2，TPP1和POT1的诱导型CRISPR KO人类细胞系的生成，它们直接与端粒相互作用或可以通过与其他亚基缔合而与端粒结合。几个亚基的纯合失活在小鼠中是致死性的，对人类端粒调节剂的大多数功能丧失研究都依赖于RNA干扰介导的基因敲除，这有其自身的局限性。我们的可诱导CRISPR方法使我们能够更方便地获得大量KO细胞，其中必需的端粒调节因子已被灭活，用于生化和分子研究。我们的系统分析揭示了人类和小鼠端粒蛋白在DNA损伤反应，端粒长度和代谢控制方面的功能差异，从而为维持端粒提供了新的见解。

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