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Interaction cloning of Rabin3, a novel protein that associates with the Ras-like GTPase Rab3A.

机译：Rabin3的相互作用克隆，Rabin3是一种与Ras样GTPase Rab3A相关的新型蛋白质。

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Rab3A is a small, Ras-like GTPase expressed in neuroendocrine cells, in which it is associated with secretory vesicle membranes and regulates exocytosis. Using the yeast two-hybrid system, we have identified a rat brain cDNA encoding a novel 50-kDa protein, which we have named Rabin3, that interacts with Rab3A and Rab3D but not with other small GTPases (Rab3C, Rab2, Ran, or Ras). Several independent point mutations in the effector domain of Rab3A (F51L, V55E, and G56D) which do not alter nucleotide binding by the GTPase abolish the interaction with Rabin3, while another mutation (V52A) appears to increase the interaction. These results demonstrate that the interaction is highly specific. However, a glutathione S-transferase-Rabin3 fusion protein associates only weakly in vitro with recombinant Rab3A and possesses no detectable GTPase-activating protein or nucleotide exchange activity, and Rabin3 overexpressed in adrenal chromaffin cells has no observable effect on secretion. The protein possess a sequence characteristic of coiled-coil domains and a second small region with sequence similarity to a Saccharomyces cerevisiae protein, Sec2p, Sec2p is essential for constitutive secretion in yeast cells and interacts with Sec4p, a close relative of the Rab3A GTPase. Rabin3 mRNA and protein are widely expressed but are particularly abundant in testes.
机译：Rab3A是在神经内分泌细胞中表达的小的Ras样GTP酶，在其中与分泌性囊泡膜相关并调节胞吐作用。使用酵母双杂交系统，我们已经鉴定出一种大鼠大脑cDNA，其编码一种新的50 kDa蛋白，我们将其命名为Rabin3，该蛋白与Rab3A和Rab3D相互作用，但不与其他小型GTPases（Rab3C，Rab2，Ran或Ras）相互作用。 ）。 Rab3A的效应子域中的几个独立的点突变（F51L，V55E和G56D）不改变GTPase的核苷酸结合，从而消除了与Rabin3的相互作用，而另一个突变（V52A）似乎增加了相互作用。这些结果表明相互作用是高度特异性的。但是，谷胱甘肽S-转移酶-Rabin3融合蛋白在体外仅与重组Rab3A弱结合，并且没有可检测的GTPase激活蛋白或核苷酸交换活性，并且在肾上腺嗜铬细胞中过表达的Rabin3对分泌没有明显作用。该蛋白具有卷曲螺旋结构域的序列特征，以及与啤酒酵母蛋白Sec2p，Sec2p具有序列相似性的第二个小区域，对于酵母细胞中的组成型分泌至关重要，并且与Rab3A GTPase的近亲Sec4p相互作用。 Rabin3 mRNA和蛋白质广泛表达，但在睾丸中尤为丰富。

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