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首页> 外文期刊>The European Journal of Neuroscience >Generation of embryonic stem cells and transgenic mice expressing green fluorescence protein in midbrain dopaminergic neurons.
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Generation of embryonic stem cells and transgenic mice expressing green fluorescence protein in midbrain dopaminergic neurons.

机译：在中脑多巴胺能神经元中表达绿色荧光蛋白的胚胎干细胞和转基因小鼠的产生。

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Abstract We have generated embryonic stem (ES) cells and transgenic mice with green fluorescent protein (GFP) inserted into the Pitx3 locus via homologous recombination. In the central nervous system, Pitx3-directed GFP was visualized in dopaminergic (DA) neurons in the substantia nigra and ventral tegmental area. Live primary DA neurons can be isolated by fluorescence-activated cell sorting from these transgenic mouse embryos. In culture, Pitx3-GFP is coexpressed in a proportion of ES-derived DA neurons. Furthermore, ES cell-derived Pitx3-GFP expressing DA neurons responded to neurotrophic factors and were sensitive to DA-specific neurotoxin N-4-methyl-1, 2, 3, 6-tetrahydropyridine. We anticipate that the Pitx3-GFP ES cells could be used as a powerful model system for functional identification of molecules governing mDA neuron differentiation and for preclinical research including pharmaceutical drug screening and transplantation. The Pitx3 knock-in mice, on the other hand, could be used for purifyingprimary neurons for molecular studies associated with the midbrain-specific DA phenotype at a level not previously feasible. These mice would also provide a useful tool to study DA fate determination from embryo- or adult-derived neural stem cells.
机译：摘要我们已经产生了胚胎干细胞（ES）和转基因小鼠，并通过同源重组将绿色荧光蛋白（GFP）插入Pitx3基因座。在中枢神经系统中，在黑质和腹侧被盖区的多巴胺能（DA）神经元中可以看到Pitx3导向的GFP。可以通过荧光激活细胞分选从这些转基因小鼠胚胎中分离出活的初级DA神经元。在培养中，Pitx3-GFP在一定比例的ES衍生DA神经元中共表达。此外，ES细胞衍生的表达Pitx3-GFP的DA神经元对神经营养因子有反应，并对DA特异性神经毒素N-4-甲基-1、2、3、6-四氢吡啶敏感。我们预计，Pitx3-GFP ES细胞可以用作功能强大的模型系统，用于功能性鉴定控制mDA神经元分化的分子以及用于临床前研究（包括药物筛选和移植）的系统。另一方面，Pitx3敲入小鼠可用于纯化原代神经元，以进行与中脑特异性DA表型有关的分子研究，其水平以前无法实现。这些小鼠还将提供有用的工具来研究从胚胎或成年神经干细胞中DA命运的确定。

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