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首页> 外文期刊>The Journal of molecular diagnostics: JMD >Successful Application of Hyperbranched Multidisplacement Genomic Amplification to Detect HIV-1 Sequences in Single Neurons Removed from Autopsy Brain Sections by Laser Capture Microdissection.
【24h】

Successful Application of Hyperbranched Multidisplacement Genomic Amplification to Detect HIV-1 Sequences in Single Neurons Removed from Autopsy Brain Sections by Laser Capture Microdissection.

机译：超支化多置换基因组扩增技术的成功应用，可检测通过激光捕获显微切割术从尸检脑切片中去除的单个神经元中的HIV-1序列。

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To confirm studies suggesting that HIV-1 infects neurons and to determine whether CD8(+) T lymphocytes traffic to HIV-1-infected neurons, we used laser capture microdissection to remove hippocampal neurons with and without perineuronal CD8(+) T cells from AIDS patients with HIV-1 encephalitis (HIVE) or without HIVE and from normal controls. We used hyperbranched multidisplacement amplification for whole gene amplification (MDA-WGA) plus two rounds of PCR to amplify housekeeping sequences (HK(+)) and, in HK(+) samples, to amplify HIV-1 gag, nef, and pol sequences. Sample size and, in single neurons, MDA-WGA correlated with housekeeping gene amplification (P < 0.05), whereas patient group and postmortem interval did not (P > 0.05). Neuronal viral sequences correlated with HIVE (43% vs. 13% and 0 in non-HIVE and controls, respectively) and, in HIVE cases, with perineuronal CD8(+) T lymphocytes (70% in CD8(+) samples vs. 37% of CD8(-) samples). Our results suggest that MDA-WGA is a useful technique when analyzing DNA from single cells from autopsy brains, supporting prior studies that show that neurons may contain HIV-1 neuronal sequences in vivo. The association between neuronal infection and perineuronal CD8(+) T cells supports our hypothesis that these cells specifically traffic to infected neurons but raises the possibility that CD8(+) T cells, if infected, could transmit virus to neurons.
机译：为了确认研究表明HIV-1感染神经元并确定CD8（+）T淋巴细胞是否流向HIV-1感染的神经元，我们使用激光捕获显微切割术从艾滋病中去除有或没有神经外膜CD8（+）T细胞的海马神经元。 HIV-1脑炎（HIVE）或没有HIVE且来自正常对照的患者。我们使用超支链多置换扩增进行全基因扩增（MDA-WGA），并进行两轮PCR扩增管家序列（HK（+）），并在HK（+）样品中扩增HIV-1 gag，nef和pol序列。样本量和单个神经元中的MDA-WGA与管家基因扩增相关（P <0.05），而患者组和死后间隔则无相关性（P> 0.05）。神经元病毒序列与HIVE相关（非HIVE和对照分别为43％，13％和0），在HIVE病例中，与神经周围神经CD8（+）T淋巴细胞相关（CD8（+）样本中为70％，而37 CD8（-）样品的百分比）。我们的结果表明，MDA-WGA是分析尸体解剖脑单个细胞的DNA时的有用技术，支持先前的研究表明神经元在体内可能含有HIV-1神经元序列。神经元感染和神经周围神经CD8（+）T细胞之间的关联支持我们的假设，即这些细胞专门运输到受感染的神经元，但增加了CD8（+）T细胞（如果被感染）可以将病毒传播到神经元的可能性。

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