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首页> 外文期刊>日本食品微生物学会雑誌 >蛍光RT-multiplex PCR法を用いた 食中毒起因微生物の包括的検出
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蛍光RT-multiplex PCR法を用いた 食中毒起因微生物の包括的検出

机译：荧光RT-多重PCR方法全面检测引起食物中毒的微生物

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食中毒の原因の上位を占める12種の病原微生物(細菌9種およびウィルス3種)の包括的検出に, 蛍光標識 プライマーを用いたRT-multiplex PCR法を適用した. 本法は, 細菌DNAおよびゥィルスRNAを包括的に検 出できる特徴があり, 電気泳動後の染色を必要とせず PCR産物の蛍光色と大きさの違いから病原微生物を容 易に識別することが可能である.患者糞便から細菌DNAおよびウィルスRNAを市販 のウィルスRNA抽出キットを用いて同時抽出し, 逆転 写反応後に逆転写反応物を铸型にしてmultiplex PCR法 を実施した.12種の病原微生物を三つのグループに区 分し, AセットはDiarrheagenic E. coliを, Bセットは salmonella spp., V. parahaemolyticus, C. jejuniおよび C. coli を, CセットはC. perfnngens, Norovirus, Sapo-virusおよぴAstrovirusを対象としたプライマーセット とした.食中毒等集団感染45事例と散発ほ事例に本法 を適用した結果, 常法である培養法あるいはmonoplex PCR法と有意差はなぐほぼ同等の感度と特異度が得 られた.本法は核酸抽出から遺伝子検出までを6-7時間で完 了できることから, 食中毒原因微生物の迅速スクリ一二 ング検査法として有効であること力s確認された.
机译：应用荧光标记引物的RT-多重PCR方法，以细菌DNA和病毒为基础，对12种引起食物中毒的致病微生物（9种细菌和3种病毒）进行综合检测。它具有能够全面检测RNA的功能，并且可以根据荧光颜色和PCR产物大小的差异轻松鉴定病原微生物，而无需在电泳后进行染色。使用市售的病毒RNA提取试剂盒共提取DNA和病毒RNA，进行反复制反应后，将反转录反应产物制成剑状，进行多重PCR法，将12种病原微生物分为3组。 A组针对腹泻性大肠杆菌，B组针对沙门氏菌，副溶血弧菌，空肠弯曲杆菌和大肠杆菌，C组针对产气荚膜梭菌，诺如病毒，沙波病毒和星状病毒。将这种方法应用于45例食物中毒和零星病例等暴发病例的结果，其敏感性和特异性几乎与常规培养方法或单重PCR方法相同。由于该方法可以在6-7个小时内完成从核酸提取到基因检测的整个过程，因此已被证实是一种有效的食物中毒微生物快速筛选测试方法。

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